
تعداد نشریات | 26 |
تعداد شمارهها | 447 |
تعداد مقالات | 4,557 |
تعداد مشاهده مقاله | 5,379,991 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 3,580,057 |
طراحی تلفیق ژنی پلیاولئوزین-پروانسولین و انتقال آن به گیاه کلزا (Brassica napus L.) | ||
مجله بیوتکنولوژی کشاورزی | ||
مقاله 1، دوره 10، شماره 3 - شماره پیاپی 31، دی 1397، صفحه 1-16 اصل مقاله (3.16 M) | ||
نوع مقاله: مقاله پژوهشی | ||
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22103/jab.2018.2204 | ||
نویسندگان | ||
نجمه آیت فرد1؛ اسماعیل قاسمی گوجانی* 2؛ علیرضا شافعینیا2؛ پیام پورمحمدی2 | ||
1کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه مهندسی تولید و ژنتیک گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی خوزستان، خوزستان، ایران. | ||
2استادیار گروه مهندسی تولید و ژنتیک گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی خوزستان، خوزستان، ایران. | ||
چکیده | ||
هدف: استفاده از ژن اولئوزین گیاهی یک روش مناسب برای تولید و تجمع پروتئین نوترکیب در مقیاس زیاد و همچنین استخراج راحتتر و ارزانتر میباشد. اتصال اولئوزین به ژن موردنظر، موجب هدفگیری پروتئین نوترکیب به اجسام روغنی بذر میشود. در سالهای اخیر، به منظور افزایش کارایی اولئوزین در تولید پروتئین نوترکیب، چند ژن اولئوزین (پلیاولئوزین)، به ژن هدف متصل میشود. این امر سبب تولید و تجمع پروتئین نوترکیب در سطوح اقتصادی در بذر میگردد. مواد و روشها: از اینرو برای افزایش میزان تجمع پروتئین پروانسولین در بذر گیاه کلزا، یک سازهی تلفیقی پلیاولئوزین-پروانسولین طراحی و ساخته شد. در طراحی این توالی به ترتیب از سمت /5 توالی، یک توالی کزاک، یک برچسب هیستیدین، سه ژن اولئوزین، یک جایگاه پروتئولیتیکی برای پروتئاز، ژن پروانسولین و یک کدون پایان تترانوکلئوتید قرار گرفت. این تلفیق ژنی پس از سنتز در ناقل pUC57 قرار داده شد. تلفیق ژنی، پس از هضم آنزیمی به وسیلهی آنزیمهای BamHI و SacI از pUC57 جداسازی و در ناقل دوتایی pBI121 همسانهسازی گردید. پس از تائید درج تلفیق ژنی در ناقل pBI121 با استفاده از روشهای PCR، هضم آنزیمی و توالییابی، ناقل نوترکیب به سویهی LBA4404 اگروباکتریوم انتقال داده شد. این باکتری برای تراریختی ریزنمونههای کوتیلدون و هیپوکوتیل کلزا مورد استفاد قرار گرفت. نوساقههای باززایی شده در محیط انتخابی حاوی کانامایسین گزینش شدند. نتایج: آنالیز گیاهان تراریخته در سطح DNA با استفاده از روش PCR انجام و یک قطعهی 120 جفت بازی (مطابق با بخشی از ژن پروانسولین) تکثیر شد. همچنین تکثیر این قطعهی 120جفتبازی با روش RT-PCR، بیانگر بیان ژن هدف در گیاهان تراریخته بود. | ||
کلیدواژهها | ||
پلیاولئوزین؛ پروانسولین انسانی؛ پروتئین نوترکیب؛ کلزا | ||
مراجع | ||
References Alam S, Khaleda L, Mohammad Al-Forkan S (2013) Establishment of regeneration protocol for Canola (Brassica napus L.). Global J Sci Frontier Res 13, 7-11. Bhat WW, Lattoo SK, Rana S et al. (2012) Efficient plant regeneration via direct organogenesis and Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of Picrorhiza kurroa: an endangered medicinal herb of the alpine Himalayas. In Vitro Cell Develop Biol Plant 48, 295-303. Banilas G, Daras G, Rigas S, Moloney MM (2011) Oleosin di-or tri-meric fusions with GFP undergo correct targeting and provide advantages for recombinant protein production. Plant Physiol Biochem 49, 216-222. Bhalla PL, Singh MB (2008) Agrobacterium-mediated transformation of based vectors. Plant Cell Rep 6, 321–325 Bhatla SC, Kaushik V, Yadav MK (2010) Use of oil bodies and oleosins in recombinant protein production and other biotechnological applications. Biotechnol Adv 28, 293-300. Boothe J, Nykiforuk C, Shen Y et al. (2010) Seed‐based expression systems for plant molecular farming. Plant Biotechnol J 8, 588-606. Boothe JG, Saponja JA, Parmenter DL (1997) Molecular farming in plants: oilseeds as vehicles for the production of pharmaceutical proteins. Drug Develop Res 42, 172-181. Brown CM, Stockwell PA, Trotman CN, Tate WP (1990) The signal for the termination of protein synthesis in procaryotes. Nucleic Acids Res 18, 2079-2086 Brown TA (1990) Gene cloning and DNA analysis an introduction. Wiley-blackwell. P. 246. Chaudhary S, Parmenter DL, and Moloney MM (1998). Transgenic Brassica carinata as vehicle for the production of recombinant proteins in seeds. Plant Cell Rep 17, 195–200. Chen MX, Zheng SX, Yang YN et al. (2014) Strong seed-specific protein expression from the Vigna radiata storage protein 8SGα promoter in transgenic Arabidopsis seeds. J Biotechnol 174,.49-56. Chen R, Zhang C, Yao B et al. (2013) Corn seeds as bioreactors for the production of phytase in the feed industry. J Biotechnol 165, 120-126. Conley AJ, Joensuu JJ, Richman A, Menassa R (2011) Protein body-inducing fusions for high-level production and purification of recombinant proteins in plants. Plant Biotechnol J 9, 419–433. Feng L, Chan WW, Roderick SL, Cohen DE (2000) High-level expression and mutagenesis of recombinant human phosphatidylcholine transfer protein using a synthetic gene: evidence for a C-terminal membrane binding domain. Biochem 39, 15399-15409. Gustafsson C, Govindarajan S, Minshull J (2004) Codon bias and heterologous protein expression. Trends Biotechnol 22, 346-353. Hiwasa-Tanase K, Nyarubona M, Hirai T et al. (2011) High-level accumulation of recombinant miraculin protein in transgenic tomatoes expressing a synthetic miraculin gene with optimized codon usage terminated by the native miraculin terminator. Plant Cell Reports 30, 113-124. Holsters M, De Waele D, Depicker A et al. (1978) Transfection and transformation of Agrobacterium tumefaciens. Mol General Genet MGG 163, 181-187. Joshi CP, Zhou H, Huang X, Chiang VL (1997) Context sequences of translation initiation codon in plants. Plant Mol Biol 35, 993-1001. Kozak M (1999) Initiation of translation in prokaryotes and eukaryotes. Gene 234, 187-208. Ling H (2007) Oleosin fusion expression systems for the production of recombinant proteins. Biologia 62, 119-123. Nykiforuk CL, Boothe JG, Murray EW et al. (2006) Transgenic expression and recovery of biologically active recombinant human insulin from Arabidopsis thaliana seeds. Plant Biotechnol J 4, 77-85. Ohta S, Mita S, Hattori T, Nakamura K (1990) Construction and expression in tobacco of a β-glucuronidase (GUS) reporter gene containing an intron within the coding sequence. Plant Cell Physiol 31, 805-813. Ólafsdóttir G, Svansson V, Ingvarsson S et al. (2008) In vitro analysis of expression vectors for DNA vaccination of horses: the effect of a Kozak sequence. Acta Veterinaria Scandinavica 50, 1-7. Parmenter DL, Boothe JG, Van Rooijen GJH et al. (1995) Production of biologically active hirudin in plant seeds using oleosin partitioning. Plant Mol Biol 29, 1167-1180. Perlak FJ, Fuchs RL, Dean DA et al. (1991) Modification of the coding sequence enhances plant expression of insect control protein genes. Proceedings of the National Academy of Sciences 88, 3324-3328. Richards E, Reichardt M, Rogers S (1994) Preparation of genomic DNA from plant tissue. Current Protocols Mol Biol 27, 2-3. Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T (1989) Molecular cloning, Vol. 2: 14-9. Schnell JA, Han S, Miki BL, Johnson DA (2010) Soybean peroxidase propeptides are functional signal peptides and increase the yield of a foreign protein. Plant Cell Reports 29, 987-996. Scott RW, Winichayakul S, Roldan M et al. (2010) Elevation of oil body integrity and emulsion stability by polyoleosins, multiple oleosin units joined in tandem head‐to‐tail fusions. Plant Biotechnol J 8, 912-927. Scott RW, Arcus VL, Roberts NJ (2012) Agriculture Victoria Services Pty Ltd and Agresearch Limited. Polyoleosins. U.S. Patent 8, 309-794. Van Rooijen GJ, Moloney MM (1995) Plant seed oil-bodies as carriers for foreign proteins. Nature Biotechnol 13, 72-77. Winichayakul S, Pernthaner A, Livingston S et al. (2012). Production of active single-chain antibodies in seeds using trimeric polyoleosin fusion. J Biotechnol 161, 407– 413. Wu Y, Zhao D, Song L, Xu W (2009) Heterologous expression of synthetic chicken IFN-γ in transgenic tobacco plants. Biologia 64, 1115-1122. | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 604 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 570 |