
تعداد نشریات | 26 |
تعداد شمارهها | 447 |
تعداد مقالات | 4,557 |
تعداد مشاهده مقاله | 5,379,997 |
تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 3,580,061 |
بیان پروتئین پوششی نوترکیب ویروس X سیب زمینی در باکتری Escherichia coli | ||
مجله بیوتکنولوژی کشاورزی | ||
مقاله 10، دوره 11، شماره 4، اسفند 1398، صفحه 175-192 اصل مقاله (3.09 M) | ||
نوع مقاله: مقاله پژوهشی | ||
شناسه دیجیتال (DOI): 10.22103/jab.2020.2529 | ||
نویسندگان | ||
حسین معصومی* 1؛ پریسا حسن شیخی2؛ جعفر ذوالعلی3؛ اکبر حسینی پور2؛ محمد مداحیان2 | ||
1کرمان کرمان، دانشگاه شهید باهنر، دانشکده کشاورزی، بخش گیاهپزشکی | ||
2گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان | ||
3استاد | ||
چکیده | ||
اهداف: ویروس X سیب زمینی (PVX) از خانواده Alphaflexiviridaeو جنس Potexvirus یکی از رایجترین و گستردهترین ویروسهای آلودهکننده سیب زمینی در جهان میباشد. بهدلیل گسترش و خسارت اقتصادی این ویروس در ایران، شناسایی و ردیابی آن با استفاده از روشهای با صرفهتر ضروری میباشد. تولید آنتیبادی چندهمسانهای با استفاده از فناوری دی اِن اِی نوترکیب، یک راهکار مفید برای تسهیل شناسایی این ویروس در طبیعت میباشد. مواد و روشها: براین اساس، در بررسی حاضر، یک نمونه سیب زمینی آلوده به PVX از مزارع سیبزمینی در زرند، استان کرمان جمع آوری و آلودگی آن نسبت به ویروس مذکورتوسط آزمون DAS-ELISA تایید گردید. جدایه مذکور جهت تکثیر، بر روی توتون (Nicotiana glutinosa) مایهزنی گردید. پس از استخراج آر اِن اِی از گیاه آزمون، با استفاده از واکنش RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش برای آنزیمهای برشی، توالی پروتئین پوششی ویروس تکثیر و در ناقل بیان پروکاریوتی (pQE60) همسانهسازی گردید. پلاسمید نوترکیب، به باکتری Escherichia coli سویه M15، منتقل شد. نتایج: پس از القای بیان، پروتئین مورد نظر استخراج و با تکنیک SDS-PAGE در ژل پلی آکریلامید 5/12 % مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل بیانگر آن است که وزن مولکولی باند حاصله در آزمون SDS-PAGE با وزن مولکولی پروتئین پوششی (kDa 24) مطابقت دارد. همچنین بیان پروتئین پوششی ویروس در تکنیک دات بلات نیز تأیید گردید. نتیجه گیری نهایی: در این تحقیق، یک آنتیژن نوترکیب مناسب جهت تشخیص ویروس X سیب زمینی تهیه گردید که بهخوبی توسط آنتیسرم تولید شده از طریق تزریق پیکرههای کامل ویروس به خرگوش در آزمون دات بلات شناسایی شد. تولید آنتیبادی چندهمسانهای با استفاده از آنتیژن ویروسی نوترکیب، گامی موثر در زمینه تسریع و تسهیل فرآیند شناسایی سرولوژیکی نمونههای آلوده به این ویروس مهم خواهد بود. | ||
کلیدواژهها | ||
باکتری E. coli؛ بیان پروتئین نوترکیب؛ پروتئین پوششی ویروس؛ ویروس X سیب زمینی | ||
مراجع | ||
References
Abdel-Salam AM, Abdel-Kader HS, El-Saghir SM (2005) Biological, serological, and molecular detection of banana streak badnavirus in vegetatively propagated banana plants in Egypt. Egypt J Virol 2, 255-268.
Abdel-Salam AM, Abdel-Kader HS, El-Saghir SM, Hussein MH (2004) Purification, serology, and molecular detection of Egyptian isolates of banana bunchy top babuvirus and faba bean necrotic yellows nanovirus. Arab J Biotechnol 7, 141-155.
Abdel-Salam AM, EI-Attar AK, Gambley CF (2014) Production of polyclonal antisera to a recombinant coat protein of Potato viruas Y expressed in Escherrichia coli and its application for immunodiagnosis. Int J Virol 10, 1-16.
Abouzid AM, Freitas-Astua J, Purcifull DE et al. (2002) Serological studies using polyclonal antisera prepared against the viral coat protein of four begomoviruses expressed in Escherichia coli. Plant Dis 86, 1109-1114.
Adamas MJ, Accotto GP, Agranovsky AA, Bar-Joseph M, Brunt AA (2005) Family Flexiviridae, In: Fauquet CM, Mayo MA, Maniloff J, Desselberger U, Ball La (eds), Virus taxonomy: the eighth report of the ICTV. Academic press, New York, p. 1089-1124.
Amersham Pharmacia Biotech (2000) The Recombinant Protein Handbook – Protein amplification and simple purification. Amersham Pharmacia Biotech AB, Sweden.e.
Baneyx F (1999) Recombinant proteins expression in Escherichia coli. Curr Opin Biotechnol 10, 411-421.
Beemster ABR, Rozendaal A (1972) Potato viruses: Properties and symptoms, In: J.A. de Bokx (ed.), Viruses of potatoes and seed-potato production. PUDOC, Wageningen, p. 115-143.
Beuve M, Sempé L, Lemaire O (2007) A sensitive one-step real-time RT-PCR method for detecting Grapevine leafroll-associated virus 2 variants in grapevine. J Virol Methods 141, 117-124.
Bostan H, Haliloglu K (2004) Distribution of PLRV, PVS, PVX and PVY (PVYN, PVYO, and PVYC) in the seed potato tubers in Turkey. PJBS 7, 1140-1143.
Buchen-Osmond C (1987) Potato X Potexvirus. Description and lists from the VIDE database. From http://bio-mirror.im.ac.cn/mirrors/pvo/vide/descr651.htm.
Cerovska N, Moravec T, Plchova H et al. (2010) Production of polyclonal antibodies to Potato virus X using recombinant coat protein. J Phytopathol 158,66-68.
Cerovska N, Moravec T, Rosecka P et al. (2003) Production of polyclonal antibodies to a recombinant coat protein of Potato map-top Virus. J Phytopathol 151, 195-200.
Clark MF, Adams SAN (1997) Characteristics of microplates method of enzyme-linked-immunosorbent assay for detection of plant viruses. J Gen Virol 34, 475-483.
Cockerham G (1955) Strains of potato virus X, In: Streutgers E, Beemster ABR, van der Want JPH (eds.), Proceeding of 2nd conference on potato virus diseases. Lisse-Wageningen p. 89–92.
Cox AB, Jones RAC (2010) Genetic variability in the coat protein gene of Potato virus X and the current relationship between phylogenetic placement and resistance groupings. Arch 155, 1349–1356
Fajardo TVM, Barros DR, Nickel O, et al. (2007) Expression of Grapevine leafroll-associated virus-3 coat protein gene in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies. Fitopatol. Bras 32, 496-500.
Feigelstock DA, Tozzini AC, Hopp HE (1995)Coat protein sequence of a resistance-breaking strain of Potato virus X isolated in Argentina. Virus Genes 10, 289-292.
Fischer B, Sumer I, Goodenough P (1993) Isolation, renaturation and formation of disulfide bonds of eukaryotic proteins expressed in Escherichia coli as inclusion bodies. Biotechnol Bioeng 41, 3-13.
Folwarczna J, Plchová H, Moravec T et al. (2008) Production of polyclonal antibodies to a recombinant coat protein of Potato virus Y. Folia Microbiologica 53, 438-442.
Janknecht R, de Martynoff G, Lou J et al. (1991) Rapid and efficient purification of native histidine-tagged protein expressed by recombinant vaccinia virus. PNAS 88, 8972-8976.
Kalendal R (2005) Fast PCR primer design and report sequence searching program with additional tools for the manipulation and analysis of DNA and protein. From http://www.Biocenter.helsinki.fi/bi/programs/fastPCR.html
Khan S, Jan AT, Mandal B et al. (2012) Immunodiagnostics of cucumber mosaic virus using antisera developed against recombinant coat protein. Archives of Phytopathology and Plant Protection 45, 561-59.
Koening R, Lesemann DE (1989) Potato virus X, potexvirus group. AAB 345, 1–5.
Koohapitagtam M, NualsriC (2013) Production of polyclonal antibodies specific to the recombinant coat protein of Blackeye cowpea mosaic virus and its use in disease detection. Kasetsart J (NaturalScience) 47, 603-613.
Ling KS, Zhu HY, Jiang ZY, Gonsalves D (2000) Effective application of DAS-ELISA for detection of grapevine leaf roll associated closterovirus-3 using a polyclonal antiserum developed from recombinant coat protein. Eur 106, 301-309.
Massumi H, Poormohammadi S, Pishyar S et al. (2014) Molecular characterization and field survey of Iranian potato virus X isolates. Virusdisease 25, 338-344.
Qiagen (2003) The QIAexpressionistTM - A handbook for high-level expression and purification of 6xHis-tagged proteins. Qiagen, Hilden, Germany.
Roland, J (2008) Bacterial protein expression – test induction. From: http://josephroland.com/lab/protocols/induction.html Last accessed 30 August 2019.
Sadeghan A, Shams-bakhsh M, Yakhchali B (2013) Expression of Citrus tristeza virus coat protein gene in Escherichia coli. Prot 2, 387-393.
Schwarz E, Scherrer G, Hobom G, Kossel H (1978) Nucleotide sequence of cro, cll and part of the 0 gene in phage lambda DNA. Nature 272, 410-414.
Shamsadden-Saeed F, Massumi H, Moradi S, et al. (2014) Incidence and characterization of Potato virus V infections in Iran. Virusdisease 25,78-84
Shams-bakhsh M, Khakvar R, Poor-Rahim R (2001) Purification, preparation of antiserum and serological diagnosis of potato virus X and Y isolated from Khuzestan province farms. J Agric Sci 24, 47-53.
Soliman AM, Barsoum BN, Mohamed GG et al. (2006) Expression of coat protein gene of the Egyptian isolate of Potato virus X in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies against it. "Arab J Biotechnol 9, 115-128.
Van Regenmortel MHV (1982) Serology and immunochemistry of Plant Viruses. Academic Press, INC. New York.e.
Verchot-Lubicz J,Ye CM, Bamunusinghe D (2007) Molecular biology of potexviruses: recent advances. J Virol 88,1643-1655.
Yu XQ, Wang HY, Lan YF (2008) Complete genome sequence of a Chinese isolate of Potato virus X and analysis of genetic diversity. Phytopathol 156, 346–351. | ||
آمار تعداد مشاهده مقاله: 975 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 397 |